产品货号:
BTN131075
中文名称:
PAGE胶糖蛋白染色试剂盒
英文名称:
PAGE Glycoprotein Staining Kit
产品规格:
10T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品为在PAGE凝胶或蛋白免疫印记硝酸纤维素膜上检测糖蛋白的试剂盒。可以用于SDS-PAGE和2D电泳的凝胶检测,也可以用于琼脂糖凝胶电泳的检测(但背景较高),还可以用于硝酸纤维素印迹膜的检测。
- 一站式,用户不要单独配制所需成分,简单快捷。
- 提供一种阳性对照蛋白及一种阴性对照蛋白,便于分析问题。
- 专一性强,通过共价修饰方式检测糖基,不检测蛋白部分。
- 快捷,只需不到两小时,而其他的染色方法需要四到五小时。
- 染色后的糖蛋白为品红色条带,背景为浅粉色或者无色
- 灵敏度高,理论上可以达到微克级别,但实际应用时灵敏度跟靶蛋白的糖基化程度相关。
组分 | 规格 | 说明 |
氧化试剂 | 2.5g | |
还原试剂 | 1.25g | |
糖蛋白染色试剂 | 250mL | |
阳性对照 | 1mg | 辣根过氧化物酶 |
阴性对照 | 1mg | 大豆胰蛋白酶抑制剂 |
空塑料瓶 | 2个 | 250mL |
保存:室温,其中阳性对照和阴性对照干粉需要4℃或更低温度长期保存,有效期一年,其中糖蛋白染色试剂的有效期只有半年。
本试剂盒足够染色10张mini-PAGE胶或20张8×8cm的蛋白印迹纤维素膜。
甲醇、冰醋酸、超纯水、1×SDS-PAGE上样缓冲液等。
- 配制3%醋酸溶液:将30mL自备的冰醋酸与970mL超纯水混匀,室温保存备用。
- 配制50%甲醇溶液:将250mL自备的甲醇与250mL超纯水混匀,室温保存备用。
- 配制氧化试剂溶液:将本试剂盒提供的氧化试剂干粉转移到本试剂盒提供的250mL空本色塑料瓶中,然后加入250mL的3%醋酸溶液(第1步配制),充分混匀溶解后得到氧化试剂溶液,室温保存备用。
- 配制还原试剂溶液:将本试剂盒提供的还原试剂干粉转移到本试剂盒提供的250mL空本色塑料瓶中,然后加入250mL的超纯水,充分混匀溶解后得到还原试剂溶液,室温保存备用。
- 配制阳性对照(辣根过氧化物酶)溶液:向装有1mg辣根过氧化物酶固体的棕色管中加入1mL 1×SDS-PAGE上样缓冲液(自备),所得辣根过氧化物酶溶液的浓度为1mg/mL,然后分装成100μL/管共10管,留下一管当天使用,其余的放-20℃长期保存。对于80mm×80mm的凝胶来说,每条泳道加10μL的阳性对照溶液即可。
- 配制阴性对照(大豆胰蛋白酶抑制剂)溶液:向装有1mg大豆胰蛋白酶抑制剂干粉的管中加入1×SDS-PAGE上样缓冲液(自备),所得大豆胰蛋白酶抑制剂溶液的浓度为1mg/mL,然后分装成100μL/管共10管,留下一管当天使用,其余的放-20℃长期保存。对于80mm×80mm的凝胶来说,每个泳道加10μL的阴性对照溶液即可。
- 样品稀释:用SDS-PAGE上样缓冲液将蛋白样品浓度稀释为1mg/mL,SDS-PAGE上样缓冲液终浓度为1×。对于80mm×80mm的凝胶来说,每个泳道加10μL的样品。
请在通风橱中进行以下操作
- 凝胶染色
- 取出电泳后的SDS-PAGE凝胶,加入到装有100mL 50%甲醇溶液的器皿中,完全浸泡30分钟后,倒出甲醇溶液。
- 用100mL 3%醋酸溶液洗涤胶块两次,每次轻轻振荡10分钟。
- 将PAGE胶块转移到装有25mL氧化试剂的器皿中,轻轻振荡15分钟。
- 用100mL 3%醋酸溶液洗涤胶块3次,每次轻轻振荡5分钟。
- 将胶块转移到装有25mL糖蛋白染色试剂的器皿中,轻轻振荡15分钟。
- 若染色试剂中有晶体析出,只需取上清液即可,不要加热溶解晶体。
- 将胶块转移到装有25mL还原试剂的器皿中,轻轻振荡5分钟。
- 用3%醋酸溶液洗涤胶块,然后用超纯水洗涤至显色,糖蛋白将显现为品红条带。胶块保存在3%醋酸溶液中。
- 取出电泳后的SDS-PAGE凝胶,加入到装有100mL 50%甲醇溶液的器皿中,完全浸泡30分钟后,倒出甲醇溶液。
- 硝化纤维素膜染色
- 用20mL 3%醋酸溶液洗涤膜两次,每次轻轻振荡10分钟。
- 将膜转移到10mL的氧化试剂中,轻轻振荡15分钟。
- 用10mL 3%醋酸溶液洗涤膜3次,每次轻轻振荡5分钟。
- 将膜转移到10mL的糖蛋白染色试剂中,轻轻振荡15分钟。
- 若染色试剂中有晶体析出,只需离心取上清液去除晶体即可,不要加热来溶解晶体。
- 将膜转移到10mL还原试剂中,轻轻振荡5分钟。
- 用3%醋酸溶液洗涤膜,然后用超纯水洗涤至显色,糖蛋白将显现为品红条带。膜可保存在3%醋酸溶液中。
- 检测后如果没有条带,可以用转膜后的PAGE胶进行检测,因为糖蛋白(尤其是高度糖基化的蛋白)转膜效果比较差。
- 用20mL 3%醋酸溶液洗涤膜两次,每次轻轻振荡10分钟。
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